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胃癌细胞凋亡与间质肥大细胞关系的研究

时间:2004-09-14南方医院消化内科  作者:郭文, 张亚历, 谭晓华, 徐克强, 周殿元查看次数:4186

 

 摘要: 本文应用a胰蛋白酶单抗以特异性地识别组织间质中的肥大细胞、应用DNA原位末端标记(TUNEL)计测腺上皮中的凋亡细胞数,同时比较p53阳性表达与肥大细胞的关系。结果表明, 胃腺癌分化程度与癌周间质MC计数无显著性差异(p<0.05)。但T3,T4期胃癌间质MC计数及出现癌转移者明显低于T1T2期或无淋巴结组 (p<0.05)。研究其与细胞凋亡指数的关系表明,MC高计组凋亡指数为13.1±2.2,低计组为7.4±2.4,两组相比有显著差异(p<0.05)。但p53表达率在两组间相差无显著性。本文结果提示,MC与凋亡指数的正相关性提示MC的增可能与诱导癌细胞凋亡有关。

    关键词:  胃癌 细胞凋亡 肥大细胞

 

 

Study on the mucosal mast cell counting and its relation to

cell apoptosis in gastric carcinoma

Guo Wen, Zhang Yali, Tan Xiaohua, Xu Keqiang, Zhou Dianyuan

PLA Institute for Digestive Diseases, Nanfang Hospital,

First Medical University of PLA, Guangzhou,510515

 

     Abstract: By using the monoclonal antibody of α-trypsinase to identify specifically mast cells (MC) in mucosa mesenchyma, the relationship of MC with cell apoptosis and infiltration in gastric carcinoma was studied. The results showed the number of mast cells had no obvious difference among the differentiational degree of cancer cell, but the count  in T3 ~ T4 or lymph node metastasis was lower and higher in T1 ~ T2 or no lymph node(p<0.05). Compared with the lower-count mast cell group, the cases with higher-count group showed higher the number of apoptotic cells (13.1±2.2 to 7.4±2.4, p<0.05). This obverse relation indicated that the increase of MC bore a relationship to the increase of apoptotic cells, and the later could reduce the infiltration and metastasis of cancer cell.

    Keywords: Mast cell  Apoptosis  Gastric carcinoma

 

 

 

    胃肠肿瘤浸润转移过程中,常可见到癌间质中有多量肥大细胞(MC)的存在, 说明MC与肿瘤的发生发展有一定的关系[1~3], 但在胃癌中的作用机制尚不十分清楚。考虑到MC具有抵抗肿瘤生长的作用,而细胞凋亡(Apoptosis)是一种特殊的细胞死亡方式,可由多种外界因素诱导和内在基因调控,因此有必要探讨胃癌细胞凋亡与间质肥大细胞的关系。本文应用a胰蛋白酶单抗以特异性地识别组织间质中的肥大细胞、应用DNA原位末端标记(TUNEL)计测腺上皮中的凋亡细胞数,同时比较p53阳性表达与肥大细胞的关系。

 

材料与方法

一、组织标本

    临床50例胃癌病人,按超声内镜检查,进行TN分期。术后每例取粘膜病变和邻近非癌变组织作石蜡包埋切片,行HE染色进行分化程度的分级。其中高分化腺癌21例、中分化腺癌18例、低分化腺癌11例。EUST分期为: T1(浸润至粘膜下)5例、T2(浸润肌层)18例、T3(浸润至浆膜)14例、T4(浸润达邻近组织)13例。N+(伴淋巴结转移)19例、N0(无淋巴结转移)31例。

二、肥大细胞免疫组化染色[4]

    应用a胰蛋白酶单抗以特异性地识别组织间质中的肥大细胞,采用免疫组化SP法进行染色:切片脱蜡及复水化,用0.3%H2O2甲醇液阻断内源酶。1:100 的正常马血清滴片以减少非特异性着色。然后滴加a胰蛋白酶单抗(1:100),于湿盒内置4 冰箱过夜,然后加1:200生物素标记的二抗45分钟,洗后滴加Avidin-HRP试剂(1:200稀释),0.1%DAB-H2O2 显色后,苏木素衬染、常规脱水透明、封片。细胞浆或细胞膜出现明显的深棕色染色为阳性反应。计测时在胃癌组织MC集中区域随机计数10个高倍视野,求其无数。

    p53单抗为Santa Cruz产品。染色方法基本上与肥大细胞染色相同。

三、DNA原位未端标记[5]

    切片脱蜡复水化后, 浸入2×SSC液中,80℃,20min,然后蒸镏水冲尽。用0.5%胃蛋白酶(pH2.0)37℃消化10min,水洗后用滤纸试干组织切片周边液体,滴加含0.005mM dNTP(dATP,dCTP,dGTP),0.005mM biotin-16-dUTP25U/ml Klenow大片段的标记液约50μl,湿盒内25℃温育1小时。.PBS漂洗后,阻断内源酶、滴加HRP-avidn复盖组织,室温下30分钟。DAB-H2O2显色、苏木素复染、常规脱水,透明,封片。阴性对照片加不含Klenow的标记液,余同。观察时,计测腺上皮中阳性细胞数换算成标记率(LR)即阳性细胞数/计测的细胞核总数×100%

 

四、统计学处理

    计数资料以均数表示,采用t检验进行显著性比较。

 

 

 

一、胃癌组织间质肥大细胞观察

    采用SP法对肥大细胞进行免疫组化染色,阳性染色物质呈棕色细胞膜或细胞浆着染, 肥大细胞散在分布,位于粘膜腺体之间或紧贴腺上皮基底膜外。高分化腺癌,癌周间质MC计数为19.4±2.32, 中分化与低分化分别为17.7±1.9417.2±2.12,各组之间无显著性差异(p<0.05)。比较胃癌分期与肥大细胞计数的关系,T3,T4期胃癌间质MC计数分别为11.3±2.2113.4±1.98, 明显低于T1(21.2±2.41)T2(18.2±1.97),经统计学处理相差有显著性(p<0.05)。对胃癌有无淋巴结转移病例进行MC计数的比较车载导航仪品牌排名排行榜lower abdominal fatbb霜怎么样才能瘦腰排行榜最有效的增高药补水如何去痘疤很好健康减肥药卸妆保养品祛痘搭配技巧化妆水什么是bb霜日霜排毒养颜什么牌子好, 19例淋巴结转移的病例,癌周MC计数为10.8±2.31,而无转移的31,MC19.8±2.34,p<0.01

二、胃癌细胞凋亡与间质肥大细胞关系的观察

    采用Biotin-16-dUPT对凋亡细胞内DNA 断裂片段进行未端标记,凋亡细胞的核呈棕色或棕褐色着染,多位于腺上皮的近腔面,总标记率为13.7±3.2。将MC计数³20分为高计组, <20作为低计组, 比较其与细胞凋亡指数的关系(见表1),高计组凋亡指数为13.1±2.2,低计组为7.4±2.4,两组相比有显著差异(p<0.05)

三、p53基因表达与胃癌间质肥大细胞关系的观察

    p53基因蛋白表达主要为细胞核标记,在癌变粘膜有20例呈阳性反应, 阳性率占40.0%, 癌旁阳性者仅4,阳性率为8.0%。研究p53基因表达与胃癌间质肥大细胞关系表明,MC高计组p53表达率为42.1%, 低计组为38.7%,两组相比,相差无显著性。

 

1.胃癌间质肥大细胞与细胞凋亡、p53基因表达的关系

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     MC计数   例数   凋亡指数   p53表达(%)

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   高计组(³20)  19    13.1±2.2*    8 (42.1)

   低计组(<20)  31     7.4±2.4    12 (38.7)

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    肥大细胞与肿瘤的关系长期以来为人们所关注,但研究结果并不完全一致[1~3]。虽有作者显示肥大细胞愈多,预后就愈差,与预后间呈现一种负相关[6]。但多数研究表明肥大细胞与肿瘤预后间存在正相关关系,肿瘤中的MC愈多,患者生存时间越长,预后也愈好。指出MC有对抗肿瘤、保护宿主的作用[7]。其机理可能与MC直接释放肝素、组胺等生物活性物质,对肿瘤有直接的细胞毒作用[8]

    本文首次采用SP法对肥大细胞进行免疫组化染色,可特异显示胃癌间质中的肥大细胞。观察表明肥大细胞散在分布,位于粘膜腺体之间或紧贴腺上皮基底膜外。MC计数与胃癌细胞的组织分化程度并无明显的相关性。比较胃癌分期与肥大细胞计数的关系,则显示T3,T4期胃癌间质MC计数明显低于和T2期胃癌,有淋巴结转移病例,癌周MC计数低于无转移的病例,提示MC可能与肿瘤的进展情况有关。

    细胞凋亡与癌细胞的存活有密切关系,其调亡过程可由多种因子所诱导[9,10].肥大细胞可释放多种细胞生物因子,因此与细胞凋亡可能存在一定的相关性。有关MC与细胞凋亡的关系目前并无文献报道,本文采用Biotin-16-dUPT对凋亡细胞内DNA 断裂片段进行未端标记,标记率为13.7±3.2。比较MC计数与细胞凋亡指数的关系表明,MC高计组凋亡指数较低计组为高,这种正相关性提示MC的增多可能与凋亡细胞的增多有关,而后者可减少癌细胞的浸润转移。p53基因与癌浸润转移及细胞凋亡有复杂的基因调控机制[11]。本文研究表明在胃癌中蛋白表达主要为细胞核标记, 阳性率占40.0%, 探讨其与胃癌间质肥大细胞关系表明,MC高计组p53表达率为与低计组相比,相差无显著性。提示MC的计数与p53基因表达间可能无明显的相关性。

    从本文结果看,胃粘膜间质MC与胃癌分期有一定的联系,MC计数的增加与胃癌的浸润转移呈负相关,其对癌进展的抵抗作用可能与增加的细胞凋亡有关。目前文献研究中,MC与胃癌关系结论不一的情况,可能与选用的MC染色与计测方法不同有关,MC单抗的免疫组化识别为MC计数的统一和规范化提供了基础。值得注意的是,胃癌的发生发展是一种十分复杂的过程,由于MC的类型不同、胞浆颗粒中的成份不同,其释放物质所起的作用不同,因此,对于取材不同的胃癌组织,也是引起MC结果差异的重要原因。


 参考文献

 

1.         陈莉,肖玉凤,陈岗.胃癌间质巨噬细胞和肥大细胞.

中国肿瘤临床. 1994; 21(4): 281

2.         熊永炎,曾俊,李蓓芸等.胃癌的浸润和转移与肿瘤侵袭部位肥大细胞的关系.

湖北医科大学学报. 1994; 15(2): 117

3.         王彤.胃癌间质肥大细胞及其与癌恶性程度关系的研究. 临床与实验病理学杂志. 1993; (增刊): 17-19

4.         张亚历,周殿元,彭华生等.大肠肿瘤增殖细胞核抗原(PCNA)表达与AgNOR计数的对比研究.中国肿瘤临床 1995;22(2):119

5.         谭晓华,张亚历,姜泊.常规组织切片凋亡细胞原位末端标记法.细胞生物学杂志 1997;(10):57

6.         Flsher Er, Paik Sm, Rockette H,et al.Prognostic significance of eosinophils and mast cells in rectal cancer. Hum Pathol 1989;20:159

7.         Takafumi U, Katsuyuki A, Masahiko T,et al.Prognostic significance of mast cell in soft tissue sarcoma. Cancer 1988;62:2416

8.         吴天鹏.组织胺对小鼠Lewis肺癌生长和转移抑制作用的病理学研究.湖北医科大学学报 1994;15:206

9.         谭晓华,张亚历,姜泊.癌症治疗的新靶点:程序化细胞死亡的基因调控.现代消化病及内镜杂志.1996;1:12~13

10.     Kerr JFR. Apoptosis: A basic biological phenomenon with wide~ranging implicatrons in tissue Kinetics. Br J Cancer  1972; 26:239~257.

11.     Oren M. The involvement of oncogenes and tumor suppressor genes in the control of apoptosis. Cancer Metast Rev 1992;11:141

 

 
 
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